GCP2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404751

Übersicht

TUBGCP2 kodiert das Gamma-Tubulin-Komplexprotein 2 (GCP2), eine Kernkomponente des γ‑Tubulin-Ringkomplexes, der an Centrosomen und anderen mikrotubuli-organisierenden Zentren die Nukleation von Mikrotubuli initiiert. GCP2 unterstützt den Aufbau des mitotischen Spindelapparats, die Reifung des Centrosoms und die Aufrechterhaltung der Mikrotubuli-Polarität und beeinflusst damit den Zellzyklusverlauf und die Chromosomentrennung. Über seine Rolle für die Integrität von Centrosom und Spindel ist eine veränderte TUBGCP2-Funktion relevant für Signalwege, die mit genomischer Instabilität und proliferativen Phänotypen verknüpft sind. Störungen von Komponenten des γTuRC werden häufig im Zusammenhang mit Centrosomen-Anomalien, Aneuploidie und Zytoskelettdefekten untersucht, wie sie in verschiedenen krankheitsassoziierten zellulären Zuständen beobachtet werden.

Das GCP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TUBGCP2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TUBGCP2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TUBGCP2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GCP2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TUBGCP2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GCP2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TUBGCP2-Exone abzielen, die für die GCP2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TUBGCP2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GCP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GCP2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TUBGCP2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GCP2 HDR-Plasmid (h) und GCP2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TUBGCP2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TUBGCP2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.