GCNF Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406967

Descripción general

NR6A1 codifica el factor nuclear de células germinales (GCNF), un receptor nuclear huérfano que actúa principalmente como represor transcripcional durante el desarrollo embrionario y en la biología de las células germinales. GCNF contribuye a la especificación de linajes y al mantenimiento de los programas de diferenciación al unirse a elementos de respuesta en los promotores diana y reclutar complejos correpresores que modifican el estado de la cromatina. En células humanas, las redes reguladas por NR6A1 se intersectan con los circuitos de pluripotencia y diferenciación, incluida la represión de genes como POU5F1/OCT4, lo que lo vincula al control epigenético de las transiciones del desarrollo. La actividad desregulada de NR6A1 se ha investigado en contextos de diferenciación aberrante y reprogramación transcripcional, lo que la hace relevante para estudios de trastornos del desarrollo y de la plasticidad de células tumorales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GCNF (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NR6A1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NR6A1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NR6A1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GCNF.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NR6A1 para la investigación de la señalización de GCNF, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NR6A1 críticos para la función de GCNF
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NR6A1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GCNF CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GCNF CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NR6A1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GCNF (h) y el plásmido HDR GCNF (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NR6A1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NR6A1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.