Plasmide CRISPR d'Activation (h) GCKR: sc-401623-ACT

Le gène humain **GCKR** code la protéine régulatrice de la glucokinase, un modulateur de l’utilisation du glucose enrichi dans les hépatocytes, qui se lie à la glucokinase et la séquestre afin d’ajuster le flux glycolytique en fonction de l’état nutritionnel et du statut en phosphate. En régulant la disponibilité de la glucokinase, **GCKR** influence la détection hépatique du glucose, la synthèse de glycogène et l’équilibre entre la glycolyse et la lipogenèse de novo, en intégrant le métabolisme des glucides à la production de triglycérides. Des variations génétiques ou une expression altérée de **GCKR** ont été associées à des modifications de la glycémie à jeun, de la sensibilité à l’insuline et des traits lipidiques circulants, ce qui en fait un acteur pertinent de la biologie des maladies métaboliques. Dans des modèles cellulaires, la perturbation de **GCKR** offre une approche exploitable pour analyser l’architecture des voies métaboliques hépatiques et les programmes transcriptionnels sensibles aux nutriments.

GCKR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GCKR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GCKR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GCKR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GCKR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GCKR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GCKR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GCKR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GCKR dans les cellules tumorales présentant une expression de GCKR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.