Plásmido CRISPR de Activación (h) GC-C: sc-403413-ACT

El gen humano **GUCY2C** codifica la **guanilato ciclasa C (GC-C)**, un receptor de membrana apical y una guanilil ciclasa particulada que cataliza la producción de **cGMP** en respuesta a péptidos endógenos de guanilina y a enterotoxinas en el epitelio intestinal. La señalización de cGMP impulsada por GC-C regula la secreción de cloruro y bicarbonato dependiente de **CFTR**, el equilibrio de fluidos epiteliales, la función de barrera y los programas de proliferación–diferenciación mediante efectores aguas abajo, entre ellos **PKG** y vías reguladas por canales dependientes de nucleótidos cíclicos. Este eje de señalización se integra con la homeostasis intestinal y las respuestas inflamatorias, y la expresión o señalización alteradas de GUCY2C se han asociado con fisiopatología gastrointestinal y con estados epiteliales vinculados a tumores. Como receptor de membrana con regulación transcripcional dependiente del contexto, GC-C se estudia con frecuencia en señalización epitelial, inmunología mucosal y el crosstalk de vías oncogénicas.

GC-C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GUCY2C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GC-C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GUCY2C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GUCY2C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GC-C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GUCY2C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GC-C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GC-C en células tumorales con expresión de GUCY2C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.