Particules Lentivirales d'Activation (h2) GATA4: sc-400122-LAC-2

Le gène humain GATA4 code un facteur de transcription à doigt de zinc qui se fixe sur des motifs GATA afin de réguler des programmes géniques contrôlant le développement cardiaque, la différenciation des cardiomyocytes et la formation d’organes dérivés de l’endoderme, notamment le foie et le pancréas. GATA4 s’intègre à des cofacteurs tels que TBX5, NKX2-5 et les protéines FOG pour moduler l’activité des enhancers et l’état de la chromatine dans des voies qui gouvernent la morphogenèse, la spécification du destin cellulaire et la transcription cardiaque en réponse au stress. Des altérations génétiques ou une régulation perturbée de GATA4 sont associées à des cardiopathies congénitales et ont été reliées au remodelage cardiaque ainsi qu’à certains cancers via leurs effets sur des réseaux transcriptionnels spécifiques de lignée. L’édition du génome ou la perturbation de GATA4 est largement utilisée pour analyser la fonction des enhancers, modéliser des phénotypes du développement dans des lignées dérivées d’iPSC et cartographier les circuits transcriptionnels en combinant des approches de knockout/knock-in avec le RNA-seq et des profils épigénomiques.

Les particules d'activation lentivirales GATA4 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de GATA4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GATA4 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription GATA4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GATA4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif GATA4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.