Gastrin Double Nickase Plasmid (h): sc-403220-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Gastrin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Gastrin Double-Nickase-Plasmid (h) und Gastrin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GAST abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Gastrin: sc-28302
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Gastrin Double Nickase Plasmid (h) | sc-403220-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Gastrin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403220-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane GAST-Gen kodiert Gastrin, ein Peptidhormon, das überwiegend von G‑Zellen des Magens gebildet wird, die Magensäuresekretion reguliert und das Wachstum der Schleimhaut unterstützt. Nach der Prozessierung von Präprogastrin zu bioaktiven, amidierten Gastrinpeptiden wirkt es vor allem über den CCKBR-Rezeptor und aktiviert intrazelluläre Signalwege einschließlich PLC/PKC sowie MAPK/ERK, die sekretorische Aktivität, epitheliale Proliferation und Differenzierung koordinieren. Eine fehlregulierte Gastrinproduktion oder -signalübertragung wurde mit Zuständen der Magenhypersekretion in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext gastrointestinaler Entzündungen, der Biologie neuroendokriner Tumoren sowie der Magen- und Kolonkarzinogenese untersucht. Als zentraler Knotenpunkt der endokrinen Signalübertragung im Darm wird GAST широко genutzt, um stimulusabhängige Sekretionsprogramme und rezeptorgekoppelte transkriptionelle Antworten in gastrointestinalen Systemen zu modellieren.
Gastrin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GAST-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GAST abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GAST-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GAST-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.