GABA_A Rθ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406766

Übersicht

GABRQ kodiert die θ-(Theta-)Untereinheit des GABA\(_A\)-Rezeptors, eines pentameren, ligandengesteuerten Chloridkanals, der die schnelle inhibitorische Neurotransmission im menschlichen Zentralnervensystem vermittelt. Durch die Regulation des Chlorideinstroms und der Membranhyperpolarisation prägen GABA\(_A\)-Rezeptoren die neuronale Erregbarkeit, die synaptische Integration und Netzwerkoszillationen und stehen funktionell mit Signalwegen in Verbindung, die die Calciumdynamik, die Neurotransmitterfreisetzung und die aktivitätsabhängige Genexpression steuern. Veränderungen im inhibitorischen Tonus unter Beteiligung spezifischer Rezeptoruntereinheiten sind mit neuroentwicklungsbedingten und neuropsychiatrischen Phänotypen assoziiert und können die Anfälligkeit für Fehlfunktionen von schlaganfall- bzw. anfallsbezogenen und stressassoziierten Schaltkreisen beeinflussen. Untereinheitszusammensetzung, Trafficking und Rezeptorpharmakologie sind zentrale Determinanten der Funktion inhibitorischer Synapsen und machen GABRQ zu einem nützlichen Ziel, um Mechanismen der GABAergen Signalübertragung zu untersuchen.

Das GABAA Rθ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GABRQ-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GABRQ-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GABRQ nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GABAA Rθ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GABRQ-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GABAA Rθ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GABRQ-Exone abzielen, die für die GABAA Rθ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GABRQ-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GABAA Rθ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GABAA Rθ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GABRQ-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GABAA Rθ HDR-Plasmid (h) und GABAA Rθ HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GABRQ-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GABRQ-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.