Plasmide Double Nickase (h) G3BP2: sc-403630-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) G3BP2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide G3BP2 Double Nickase (h) et le plasmide G3BP2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant G3BP2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) G3BP2 | sc-403630-NIC | 20 µg | $410.00 |
G3BP2 (facteur d’assemblage 2 des granules de stress G3BP) est une protéine liant l’ARN qui agit comme un nucléateur clé des granules de stress et comme régulateur de la stabilité et de la traduction des ARNm en situation de stress cellulaire. Elle participe au contrôle post‑transcriptionnel de l’expression génique en lien avec la signalisation MAPK et l’immunité innée, influençant la manière dont les cellules s’adaptent au stress oxydatif, aux infections virales et aux conditions de protéotoxicité. Par ses interactions avec l’ARN et des complexes ribonucléoprotéiques, G3BP2 contribue à coordonner le remodelage du transcriptome et du protéome en réponse au stress. Une activité dérégulée de G3BP2 et la dynamique des granules de stress ont été étudiées notamment dans le cancer, les maladies neurodégénératives et les réponses hôte–pathogène, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques du destin cellulaire et de la signalisation inflammatoire.
G3BP2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus G3BP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de G3BP2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de G3BP2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de G3BP2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.