Plasmide CRISPR d'Activation (h) G3BP2: sc-403630-ACT

Le G3BP2 humain (G3BP stress granule assembly factor 2) est une protéine liant l’ARN qui agit comme nucléateur central des granules de stress cytoplasmiques, en intégrant la signalisation et le métabolisme des ARNm lors du stress cellulaire. Il participe au contrôle de la traduction, à la stabilisation et à la dégradation des ARNm, ainsi qu’aux réponses innées au stress, via des interactions qui modulent la dynamique des complexes ribonucléoprotéiques et des voies liées aux kinases activées par le stress. G3BP2 contribue aussi plus largement à la régulation post-transcriptionnelle en coordonnant des assemblages ARN-protéine qui influencent la survie cellulaire et l’adaptation aux signaux environnementaux. Une expression dérégulée de G3BP2 et des altérations de la biologie des granules de stress ont été associées à des phénotypes liés au cancer et à des perturbations de la protéostase impliquées dans la neurodégénérescence, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques sur les granules d’ARN.

G3BP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de G3BP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

G3BP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus G3BP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription G3BP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de G3BP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus G3BP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de G3BP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie G3BP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de G3BP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.