Plasmide CRISPR d'Activation (h) G-CSF: sc-400936-ACT

CSF3 code le facteur de stimulation des colonies de granulocytes (G-CSF) humain, une cytokine sécrétée qui régule l’engagement de la lignée neutrophile, sa prolifération et sa mobilisation depuis la moelle osseuse. Le G-CSF transmet son signal via CSF3R pour activer les voies JAK/STAT, MAPK/ERK et PI3K/AKT, modulant ainsi la granulopoïèse, l’état de préparation de l’immunité innée et les réponses inflammatoires. Une signalisation CSF3–CSF3R dérégulée est associée à des altérations de la dynamique des neutrophiles et du comportement des cellules myéloïdes dans les maladies inflammatoires et dans les contextes de malignités hématologiques. En tant qu’axe de cytokine facilement manipulable, CSF3 est largement utilisé pour étudier les programmes transcriptionnels induits par les cytokines et les états de différenciation myéloïde.

G-CSF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CSF3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

G-CSF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CSF3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CSF3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de G-CSF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CSF3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de G-CSF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie G-CSF dans les cellules tumorales présentant une expression de CSF3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.