Particules Lentivirales d'Activation (h) FUS/TLS: sc-400612-LAC

FUS (FUS/TLS) code une protéine de liaison à l’ARN/ADN qui couple la régulation de la transcription à l’épissage du pré‑ARNm, au transport de l’ARNm et à la dynamique des granules de stress. FUS participe au maintien du génome en coordonnant la réponse aux dommages de l’ADN et leur réparation, notamment via des voies liées à la signalisation des cassures double brin, et influence des programmes transcriptionnels associés à l’ARN polymérase II. Grâce à ses domaines à faible complexité, FUS subit une séparation de phase qui façonne les assemblages ribonucléoprotéiques et affecte la protéostasie neuronale. Une dérégulation ou des mutations de FUS sont fortement associées à la biologie des maladies neurodégénératives, en particulier la sclérose latérale amyotrophique et la démence frontotemporale, et FUS est aussi étudié dans des contextes d’instabilité génomique et d’oncogènes de fusion associés aux sarcomes.

Les particules d'activation lentivirales FUS/TLS (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de FUS dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FUS/TLS (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription FUS, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FUS/TLS. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif FUS ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.