Plásmido Doble Nickase (h) Furin: sc-400904-NIC

FURIN codifica la furina, una convertasa de proproteínas dependiente de calcio localizada principalmente en la red trans-Golgi y en compartimentos endosómicos, donde escinde proteínas precursoras en motivos multibásicos para generar factores maduros bioactivos. Mediante esta actividad de procesamiento, la furina regula la maduración en la vía secretora de hormonas, factores de crecimiento, citocinas, receptores y enzimas que modifican la matriz extracelular, influyendo en vías relacionadas con la señalización celular, la adhesión y la remodelación tisular. La función de FURIN está integrada con el tráfico vesicular y la proteostasis, y se ha asociado la actividad alterada de la furina con una señalización inflamatoria desregulada, la progresión oncogénica y mecanismos de entrada o propagación de patógenos en células del huésped. Como nodo central del procesamiento de proproteínas, la furina se estudia con frecuencia para esclarecer cómo la maduración proteolítica controla el comportamiento de redes de señalización aguas abajo en modelos celulares humanos.

Furin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FURIN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FURIN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FURIN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FURIN alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.