FucT-IX Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420427

Panoramica

Il gene murino **Fut9** codifica la fucosiltransferasi IX (FucT-IX), una **α1,3-fucosiltransferasi** residente nel Golgi che catalizza la fucosilazione terminale di **N-glicani** e glicolipidi, contribuendo alla sintesi di epitopi di tipo Lewis, come **Lewis X**. Questa attività di glicosilazione modula l’adesione cellula–cellula, il traffico recettoriale e la trasduzione del segnale, plasmando le interazioni dipendenti dai glicani tra proteine di membrana e ligandi extracellulari. La fucosilazione dipendente da Fut9 è spesso studiata nel contesto di programmi di sviluppo e di processi immuno-correlati, in cui i motivi glicani regolano l’adesione dei leucociti e il patterning tissutale. Pattern di fucosilazione deregolati e un’espressione alterata degli antigeni Lewis sono inoltre utilizzati come indicatori molecolari in modelli di infiammazione e trasformazione oncogenica, senza implicare un’utilità clinica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FucT-IX (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fut9 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fut9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fut9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FucT-IX.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fut9 per lo studio della segnalazione di FucT-IX, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fut9 critici per la funzione di FucT-IX
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fut9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FucT-IX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FucT-IX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fut9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FucT-IX Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FucT-IX (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fut9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fut9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.