FucT-IX Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420427

Descripción general

El gen **Fut9** de ratón codifica la fucosiltransferasa IX (FucT-IX), una α1,3-fucosiltransferasa residente del aparato de Golgi que cataliza la fucosilación terminal de N-glicanos y glicolípidos, contribuyendo a la síntesis de epítopos de tipo Lewis como **Lewis X**. Esta actividad de glicosilación modula la adhesión célula–célula, el tráfico de receptores y la transducción de señales al configurar las interacciones dependientes de glicanos entre proteínas de membrana y ligandos extracelulares. La fucosilación dependiente de Fut9 se estudia con frecuencia en el contexto de programas del desarrollo y procesos relacionados con el sistema inmunitario, donde los motivos de glicanos regulan la adhesión de leucocitos y el patrón tisular. Los patrones de fucosilación desregulados y la expresión alterada de antígenos Lewis también se utilizan como lecturas moleculares en modelos de inflamación y transformación oncogénica, sin implicar utilidad clínica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FucT-IX (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Fut9 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Fut9 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Fut9 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FucT-IX.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Fut9 para la investigación de la señalización de FucT-IX, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Fut9 críticos para la función de FucT-IX
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Fut9 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FucT-IX CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido FucT-IX CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Fut9. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FucT-IX (m) y el plásmido HDR FucT-IX (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Fut9 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Fut9 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.