Plásmido CRISPR de Activación (h) FucT-IX: sc-416354-ACT

FUT9 codifica la α1,3‑fucosiltransferasa IX (FucT‑IX), una glicosiltransferasa residente en el aparato de Golgi que cataliza pasos terminales de fucosilación en la biosíntesis de antígenos tipo Lewis, incluido Lewis X (CD15). Al moldear las estructuras de glicanos en la superficie celular y en moléculas secretadas, FucT‑IX influye en eventos de reconocimiento dependientes de glicanos implicados en la adhesión y migración celulares, así como en las interacciones de células inmunitarias. La actividad de FUT9 se integra en redes más amplias de glicosilación que modulan la señalización de receptores, los programas del desarrollo y la diferenciación específica de linaje, en particular en contextos neurales y hematopoyéticos. Los patrones alterados de fucosilación y la desregulación de FUT9 se han asociado con cambios en el comportamiento de células tumorales y en microambientes inflamatorios, lo que convierte a FUT9 en un objetivo útil para estudios mecanísticos de glicoeepítopos en la biología de las enfermedades.

FucT-IX El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FUT9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FucT-IX El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FUT9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FUT9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FucT-IX. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FUT9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FucT-IX en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FucT-IX en células tumorales con expresión de FUT9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.