Plasmide CRISPR d'Activation (h) FTβ: sc-403479-ACT

FNTB code la sous-unité bêta de la farnésyltransférase protéique, une enzyme clé de la voie de biosynthèse du mévalonate/des isoprénoïdes, qui catalyse la farnésylation des protéines portant un motif CaaX. Cette modification lipidique favorise l’association à la membrane et régule la localisation ainsi que la signalisation de substrats tels que les GTPases de la famille RAS et les lamines nucléaires, influençant la prolifération, le trafic vésiculaire et la dynamique du cytosquelette. FTβ fonctionne avec la sous-unité alpha pour former l’hétérodimère actif et soutient de multiples voies pilotées par de petites GTPases, notamment les sorties de signalisation MAPK et PI3K. Une prénilation dérégulée et une activité de la farnésyltransférase altérée ont été associées à des réseaux de signalisation oncogéniques et à des défauts nucléaires liés aux lamines, faisant de FNTB un nœud pertinent pour des études mécanistiques en biologie du cancer et dans les réponses au stress cellulaire.

FTβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FNTB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FTβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FNTB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FNTB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FTβ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FNTB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FTβ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FTβ dans les cellules tumorales présentant une expression de FNTB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.