Particules Lentivirales d'Activation (h) FRY: sc-404629-LAC

FRY (homologue furry) code une grande protéine d’échafaudage de type scaffold, conservée au cours de l’évolution, impliquée dans la régulation de la polarité cellulaire, l’organisation du cytosquelette et les programmes morphogénétiques. Elle a été associée à la signalisation liée à la voie Hippo ainsi qu’à la coordination d’événements dépendants de la phosphorylation influençant la prolifération, la différenciation et l’architecture tissulaire. Dans les cellules humaines, FRY contribue au contrôle de la dynamique de l’actine et de l’organisation intracellulaire, des processus fréquemment remaniés lors de la transformation oncogénique et de la progression métastatique. Une expression altérée de FRY ou des perturbations de réseaux centrés sur FRY ont été rapportées dans des études de biologie tumorale et de phénotypes du développement, ce qui soutient sa pertinence pour l’exploration des voies de signalisation dans des modèles de maladie.

Les particules d'activation lentivirales FRY (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de FRY dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FRY (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription FRY, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FRY. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif FRY ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.