FRP-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422898

Descripción general

Frzb codifica FRP-3 (también conocida como proteína 3 relacionada con Frizzled secretada), un modulador extracelular de la señalización Wnt que se une a ligandos Wnt y puede atenuar la activación de los receptores Frizzled. Al modular la transcripción canónica dependiente de β-catenina y las vías Wnt no canónicas, FRP-3 contribuye a la regulación del patrón embrionario, la morfogénesis tisular y la diferenciación de linajes mesenquimales, incluida la homeostasis del hueso y el cartílago. En modelos murinos, la alteración de la actividad de FRP-3 se ha asociado con cambios en la dinámica de formación ósea y en la remodelación de la matriz extracelular, procesos que con frecuencia se relacionan con anomalías del desarrollo y fenotipos degenerativos. Dado que la señalización Wnt está estrechamente ligada a las decisiones de destino celular y al control proliferativo, Frzb se estudia ampliamente en contextos en los que el desequilibrio de esta vía contribuye a la remodelación tisular asociada a la inflamación y a la biología tumoral.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FRP-3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Frzb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Frzb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Frzb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FRP-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Frzb para la investigación de la señalización de FRP-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Frzb críticos para la función de FRP-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Frzb para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FRP-3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido FRP-3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Frzb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FRP-3 (m) y el plásmido HDR FRP-3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Frzb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Frzb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.