Plasmide CRISPR/Cas9 KO FRP-1 (m): sc-422897

Présentation

Sfrp1 code la protéine sécrétée « secreted frizzled-related protein 1 » (FRP-1), un modulateur sécrété de la signalisation Wnt qui se lie aux ligands Wnt et aux récepteurs Frizzled afin de façonner l’amplitude de la voie et ses gradients spatiaux. En ajustant la transcription canonique dépendante de la β-caténine et les sorties Wnt non canoniques, FRP-1 influence la prolifération, la différenciation et la migration cellulaires, ainsi que le remodelage de la matrice extracellulaire au cours du développement et du maintien de l’homéostasie tissulaire. Dans des modèles murins et des études mécanistiques, une activité altérée de Sfrp1 a été associée à des états de dérégulation de la voie Wnt pertinents pour la fibrose, des phénotypes métaboliques et squelettiques, ainsi que des contextes de signalisation liés aux tumeurs. Comme Sfrp1 agit à l’interface extracellulaire, il est fréquemment utilisé pour disséquer la part du contrôle autocrine versus paracrine des programmes pilotés par Wnt.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FRP-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sfrp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sfrp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sfrp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FRP-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sfrp1 pour l'étude de la signalisation de FRP-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sfrp1 essentiels à la fonction de FRP-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sfrp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FRP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FRP-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sfrp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FRP-1 plasmide HDR (m) et le FRP-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sfrp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sfrp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.