Plásmido Doble Nickase (h) frizzled-7: sc-401590-NIC

FZD7 codifica frizzled-7, un receptor de Wnt con siete dominios transmembrana que se une a ligandos WNT y transduce señales tanto a través de la transcripción canónica dependiente de β-catenina como de las vías no canónicas de polaridad celular planar y de Ca²⁺. A través de estas redes, frizzled-7 influye en la especificación del destino celular, la proliferación, la polaridad y la migración, integrándose con mediadores aguas abajo como Dishevelled y regulando programas de genes diana que determinan la homeostasis tisular. La señalización aberrante de FZD7/Wnt se ha asociado con fenotipos tipo célula madre desregulados, procesos vinculados a la transición epitelio-mesenquimal y alteraciones en las interacciones con el microambiente tumoral en múltiples contextos de enfermedad. Como resultado, FZD7 se estudia con frecuencia como un nodo en la modulación de la vía Wnt, la selectividad receptor–ligando y el crosstalk entre vías en biología del desarrollo y del cáncer.

frizzled-7 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FZD7 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FZD7. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FZD7. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FZD7 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.