FPR Double Nickase Plasmid (h): sc-418173-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FPR Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FPR Double-Nickase-Plasmid (h) und FPR Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FPR1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FPR Double Nickase Plasmid (h) | sc-418173-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FPR Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418173-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Formylpeptidrezeptor 1 (FPR1) kodiert FPR, einen Gi-gekoppelten GPCR, der N-formylierte Peptide und andere chemotaktische Liganden erkennt, um die Migration von Neutrophilen und Monozyten zu steuern. Die Ligandenbindung aktiviert PLCβ-/Ca²⁺-Flux, PI3K–AKT-, MAPK- und Small-GTPase-Signalwege und koordiniert so Aktin-Remodelling, Degranulation sowie die NADPH-Oxidase-abhängige Bildung reaktiver Sauerstoffspezies während angeborener Immunantworten. Die FPR1-Aktivität prägt das Leukozyten-Trafficking und die Freisetzung inflammatorischer Mediatoren und steht damit in Zusammenhang mit fehlregulierter Entzündung und Gewebeschädigung. Veränderte FPR1-Signalgebung wurde sowohl in infektiösen als auch in sterilen Entzündungssituationen untersucht sowie im Tumormikromilieu, wo die Chemotaxis myeloider Zellen die Immunzusammensetzung beeinflussen kann.
FPR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FPR1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FPR1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FPR1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FPR1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.