Plasmide Double Nickase (h) FOXE3: sc-404466-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FOXE3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FOXE3 Double Nickase (h) et le plasmide FOXE3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FOXE3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FOXE3 Antibody (G-1): sc-393526
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FOXE3 | sc-404466-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FOXE3 | sc-404466-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FOXE3 code un facteur de transcription de la famille forkhead box, indispensable au développement du segment antérieur et du cristallin, où il régule des programmes d’expression génique contrôlant la prolifération, la différenciation et le maintien de l’identité des cellules épithéliales du cristallin. En se liant à l’ADN via son domaine forkhead, FOXE3 influence des réseaux transcriptionnels du développement ainsi que des processus liés au cycle cellulaire qui façonnent la morphogenèse oculaire et préservent la transparence des tissus. Une dérégulation ou une perte de fonction de FOXE3 est associée à des troubles oculaires congénitaux, notamment la dysgénésie du segment antérieur et des phénotypes de cataracte, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du développement oculaire humain et des mécanismes de la maladie. FOXE3 est donc largement utilisé comme marqueur et régulateur dans des modèles de biologie du cristallin, de contrôle transcriptionnel et de génétique du développement.
FOXE3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FOXE3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FOXE3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FOXE3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FOXE3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.