Plasmide CRISPR d'Activation (h) FOXD2: sc-410785-ACT

FOXD2 code un facteur de transcription de la famille forkhead box (FOX) qui se lie à des motifs d’ADN spécifiques de séquence afin de réguler des programmes d’expression génique impliqués dans l’identité cellulaire et la mise en place des patrons du développement. En tant que régulateur nucléaire, FOXD2 contribue à des réseaux transcriptionnels contrôlant la spécification des lignages, la différenciation et la morphogenèse des tissus grâce à une modulation coordonnée de gènes cibles en aval. Une régulation anormale de la transcription par la famille FOX est fréquemment associée à une prolifération aberrante et à des états de différenciation altérés, ce qui fait de FOXD2 un gène pertinent pour l’étude des troubles du développement et des circuits de régulation génique liés au cancer. Le FOXD2 humain est donc utile pour analyser comment la dose d’un facteur de transcription remodèle les sorties transcriptionnelles dépendantes de la chromatine dans des systèmes modèles.

FOXD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOXD2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FOXD2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOXD2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOXD2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FOXD2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOXD2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FOXD2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FOXD2 dans les cellules tumorales présentant une expression de FOXD2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.