FMNL3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406244

Descripción general

FMNL3 (proteína 3 similar a formina) es un factor de nucleación y elongación de actina regulado por GTPasas de la familia Rho que coordina la remodelación del citoesqueleto de actina cortical. Favorece la formación de filopodios y lamelipodios, regula la polaridad celular y contribuye a la migración dirigida a través de vías vinculadas a la señalización de CDC42/RAC y a la dinámica del citoesqueleto. La actividad de FMNL3 influye en la protrusión de la membrana, el recambio de adhesiones y los procesos de tráfico intracelular que dependen del ensamblaje de actina. La desregulación de la expresión o de la señalización de FMNL3 se ha asociado con fenotipos relevantes para la invasión y la metástasis de células tumorales en múltiples sistemas modelo, lo que la convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la motilidad y el control del citoesqueleto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FMNL3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FMNL3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FMNL3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FMNL3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FMNL3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FMNL3 para la investigación de la señalización de FMNL3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FMNL3 críticos para la función de FMNL3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FMNL3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FMNL3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FMNL3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FMNL3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FMNL3 (h) y el plásmido HDR FMNL3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FMNL3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FMNL3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.