FKBP25 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410783-ACT

Humanes FKBP3 kodiert FKBP25, ein nukleäres FK506-bindendes Immunophilin mit Peptidyl-Prolyl-cis–trans-Isomerase-Aktivität, das die Proteinfaltung und die konformationelle Regulation nukleärer Komplexe unterstützt. FKBP25 interagiert mit chromatinassoziierten Faktoren und trägt zur Transkriptionskontrolle, zur DNA-Schadensantwort sowie zu zellzyklusgekoppelten nukleären Prozessen bei, einschließlich der Modulation p53-abhängiger Signalwege. Aufgrund dieser Funktionen wird FKBP3 im Zusammenhang mit Genomstabilität, epigenetischer Regulation und stressadaptiven Transkriptionsprogrammen untersucht. Veränderte FKBP3/FKBP25-Aktivität und -Expression wurden in der Biologie proliferativer und entzündungsassoziierter Erkrankungen als Korrelate einer dysregulierten nukleären Signalübertragung und Chromatinfunktion untersucht.

FKBP25 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FKBP3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FKBP25 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FKBP3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FKBP3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FKBP25-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FKBP3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FKBP25-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FKBP25-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FKBP3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.