Particules Lentivirales d'Activation (m) Fis1: sc-426020-LAC

La protéine murine Fis1 (« fission 1 ») est une protéine de la membrane externe mitochondriale qui contribue à coordonner la fission mitochondriale en mobilisant la machinerie DRP1 et en organisant les sites de scission, façonnant ainsi la morphologie et la répartition des mitochondries. Par ses effets sur la dynamique mitochondriale, Fis1 influence la mitophagie, l’efficacité de la phosphorylation oxydative, l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et la signalisation de l’apoptose. Des perturbations de l’équilibre fission–fusion régulé par Fis1 ont été associées à des phénotypes de stress mitochondrial pertinents pour la neurodégénérescence, les dysfonctions cardiométaboliques et la signalisation inflammatoire dans divers systèmes modèles. En conséquence, Fis1 est fréquemment utilisée pour étudier les voies de contrôle qualité des mitochondries et la régulation, dépendante des organites, du métabolisme et de la survie cellulaires.

Les particules d'activation lentivirales Fis1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Fis1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Fis1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Fis1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Fis1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Fis1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.