Plasmide CRISPR d'Activation (h) Fis1: sc-401007-ACT

Le gène humain **FIS1** code la protéine 1 de fission mitochondriale (**Fis1**), un adaptateur de la membrane externe des mitochondries qui aide à recruter et à organiser la machinerie de fission afin de contrôler la division mitochondriale, la morphologie et la distribution. En coordonnant la dynamique mitochondriale avec l’état bioénergétique, la mitophagie et la signalisation apoptotique, Fis1 contribue aux réponses cellulaires au stress et au contrôle qualité du réseau mitochondrial. Une expression altérée de **FIS1** ou un déséquilibre fission–fusion a été associé à des phénotypes de dysfonction mitochondriale observés dans les maladies neurodégénératives, les troubles cardiométaboliques et la reprogrammation métabolique liée au cancer. Dans les systèmes expérimentaux, la modulation de **FIS1** est utilisée pour étudier comment l’architecture mitochondriale influence la gestion des ROS, l’homéostasie du calcium et la signalisation immunitaire innée d’origine mitochondriale.

Fis1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FIS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Fis1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FIS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FIS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Fis1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FIS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Fis1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Fis1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FIS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.