Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Filamin 1 Double Nickase Plasmid (m): sc-431396-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Filamin 1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Filamin 1 Double-Nickase-Plasmid (m) und Filamin 1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Flna abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Filamin 1: sc-17749
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Filamin 1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-431396-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen *Flna* kodiert Filamin 1, ein großes aktinbindendes Scaffold-Protein, das F‑Aktin-Netzwerke quervernetzt und die Signalübertragung von Membranrezeptoren mit dem Umbau des Zytoskeletts koordiniert. Filamin 1 reguliert Zellform, Adhäsion und Mechanotransduktion, indem es Komplexe organisiert, an denen Integrine, kleine GTPasen und zahlreiche transmembrane Rezeptoren beteiligt sind, und beeinflusst dadurch Migration und Gewebemorphogenese. In verschiedenen Zelltypen überschneiden sich FLNA-abhängige zytoskelettale Dynamiken mit Signalwegen, die den Umsatz fokaler Adhäsionen und die Kraftübertragung steuern, wodurch *Flna* ein wesentlicher Determinant von Polarisations- und Motilitätsprogrammen ist. Eine Störung oder veränderte Regulation von Filamin 1 wurde mit Entwicklungsanomalien und krankheitsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, die auf abweichende Zellmigration sowie vaskuläre oder Bindegewebsdefekte zurückgehen; dies unterstützt seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in zytoskelettfokussierten Studien.
Filamin 1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Flna-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Flna abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Flna-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Flna-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.