Fibulin-3 Plasmide Double Nickase (h): sc-401978-NIC

EFEMP1 codifica la fibulina-3, una glicoproteina secreta della matrice extracellulare che si associa alle reti di fibre elastiche e all’architettura delle membrane basali. La fibulina-3 modula le interazioni cellula–matrice, il rimodellamento tissutale e l’equilibrio delle proteasi, inclusa la regolazione dell’attività delle metalloproteinasi e il cross-talk di segnalazione con vie come TGF-β ed EGFR, che influenzano adesione, migrazione e risposte allo stress. L’espressione di EFEMP1 è collegata all’omeostasi della matrice extracellulare nei tessuti oculari, vascolari ed epiteliali, e la sua disregolazione è stata studiata in contesti che coinvolgono deposizione anomala di matrice, proteostasi compromessa e segnalazione angiogenica alterata. Queste caratteristiche rendono EFEMP1 un bersaglio utile per studi meccanicistici del comportamento cellulare guidato dalla ECM e di fenotipi dipendenti dal microambiente.

Fibulin-3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EFEMP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EFEMP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EFEMP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EFEMP1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.