Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Fibrillarin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400741
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Fibrillarin El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Fibrillarin, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Fibrillarin Anticuerpo (G-8): sc-374022
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Fibrillarin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400741 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
FBL codifica la fibrilarina, una metiltransferasa nucleolar esencial que cataliza la metilación 2′-O de la ribosa del pre-rRNA dentro de complejos snoRNP de caja C/D, apoyando la biogénesis ribosomal y la capacidad de traducción. La fibrilarina contribuye al procesamiento del pre-rRNA, a la organización del nucléolo y a la coordinación de la modificación del ARN con el crecimiento celular y las respuestas al estrés. La homeostasis nucleolar alterada y la producción de ribosomas son características recurrentes de patologías proliferativas y del neurodesarrollo, y la desregulación de FBL se ha vinculado a cambios en los programas de procesamiento de ARN y en la aptitud celular. La fibrilarina también es un autoantígeno bien caracterizado en enfermedades autoinmunes sistémicas, lo que conecta la biología de las RNP nucleolares con el reconocimiento inmunitario.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Fibrillarin (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FBL en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FBL junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FBL tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Fibrillarin.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FBL para la investigación de la señalización de Fibrillarin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de FBL críticos para la función de Fibrillarin
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FBL para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Fibrillarin CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Fibrillarin CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FBL. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Fibrillarin (h) y el plásmido HDR Fibrillarin (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FBL para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FBL definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.