Plasmide CRISPR/Cas9 KO FGF-6 (h): sc-405239

Présentation

FGF6 code le facteur de croissance des fibroblastes 6 (FGF-6), un ligand de signalisation sécrété qui se lie principalement aux récepteurs FGFR afin d’activer en aval les voies MAPK/ERK, PI3K/AKT et PLCγ. Il contribue à la régulation de la prolifération, de la survie et de la différenciation cellulaires, avec des rôles marqués dans le développement et la régénération du muscle squelettique ainsi que dans le remodelage tissulaire. Une altération de la signalisation FGF6 peut perturber des programmes transcriptionnels dépendants des facteurs de croissance et des processus associés à la matrice extracellulaire, ce qui la rend pertinente pour l’étude d’une signalisation proliférative dérégulée et de la spécification des lignages. Dans les systèmes cellulaires humains, FGF-6 constitue un point d’entrée exploitable pour analyser le dialogue entre facteurs de croissance et les réponses des voies FGFR dépendantes du contexte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FGF-6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FGF6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FGF6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FGF6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FGF-6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FGF6 pour l'étude de la signalisation de FGF-6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FGF6 essentiels à la fonction de FGF-6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FGF6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FGF-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FGF-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FGF6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FGF-6 plasmide HDR (h) et le FGF-6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FGF6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FGF6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.