FGF-5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401993-ACT

FGF5 kodiert den Fibroblasten-Wachstumsfaktor 5 (FGF‑5), einen sezernierten mitogenen Liganden, der über FGFR-Tyrosinkinase-Rezeptoren signalisiert und so Zellproliferation, Differenzierung und Gewebeumbau reguliert. Die FGF‑5-Aktivität aktiviert kanonische Wachstumsfaktor-Signalkaskaden einschließlich MAPK/ERK und PI3K/AKT und beeinflusst epithel–mesenchymale Interaktionen sowie Entwicklungsprogramme. In der Humanbiologie wird eine veränderte FGF5-Expression mit fehlregulierter Wachstumssignalgebung in Verbindung gebracht und häufig in Kontexten wie Haut- und Haarfollikelzyklus, wundassoziiertem Remodeling und der Aktivierung onkogener Signalwege untersucht. Diese Eigenschaften machen FGF5 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um die Dynamik der FGFR-getriebenen Signalübertragung und die transkriptionelle Kontrolle von Wachstumsfaktor-Netzwerken zu analysieren.

FGF-5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen FGF5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

FGF-5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des FGF5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der FGF5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen FGF-5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native FGF5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von FGF-5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des FGF-5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem FGF5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.