FDX1L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-426948

Übersicht

Fdx1l kodiert Ferredoxin 1-like (FDX1L), ein mitochondriales Protein der Ferredoxin-Familie, das an Elektronentransferreaktionen beteiligt ist, welche das mitochondriale Redoxgleichgewicht und den oxidativen Stoffwechsel unterstützen. Indem FDX1L Elektronen zu mitochondrialen Enzymen transportiert, kann es Signal- und Stoffwechselwege beeinflussen, die mit der Aufrechterhaltung von Eisen-Schwefel-Clustern, steroidogenen oder häm-assoziierten Reaktionen sowie der allgemeinen mitochondrialen Homöostase verknüpft sind. Störungen ferredoxinabhängiger Prozesse in den Mitochondrien können den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies, die metabolische Flexibilität und Stressantworten verändern, wodurch Fdx1l für Studien zur mitochondrialen Dysfunktion relevant ist. In Mausmodellen stellt Fdx1l einen gut untersuchbaren Ansatzpunkt dar, um zu erforschen, wie der mitochondriale Elektronentransfer mit dem zellulären Stoffwechsel und krankheitsrelevanten Phänotypen zusammenhängt, die durch eine beeinträchtigte mitochondriale Aktivität verursacht werden.

Das FDX1L CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Fdx1l-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Fdx1l-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Fdx1l nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FDX1L-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Fdx1l-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FDX1L-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Fdx1l-Exone abzielen, die für die FDX1L-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Fdx1l-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FDX1L CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FDX1L CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Fdx1l-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FDX1L HDR-Plasmid (m) und FDX1L HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Fdx1l-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Fdx1l-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.