Plásmido CRISPR de Activación (h) FBP2: sc-404139-ACT

KHSRP codifica la proteína reguladora del empalme tipo KH (FBP2), un factor de unión a ARN que coordina la regulación génica postranscripcional al controlar el empalme del pre-ARNm, la estabilidad, la localización y la traducción del ARNm. FBP2 interactúa con elementos ricos en AU y con motivos de ARN ricos en G, y modula programas de metabolismo del ARN que moldean la diferenciación celular, las respuestas al estrés y las salidas de señalización inflamatoria. A través de sus funciones en el procesamiento y recambio del ARN, KHSRP influye en vías vinculadas a la proliferación y la apoptosis, y la actividad alterada de KHSRP se ha asociado con firmas de expresión génica desreguladas observadas en contextos de biología del cáncer, disfunción inmunitaria y enfermedades neurológicas. Estas propiedades convierten a KHSRP en una diana útil para diseccionar redes de regulación del ARN y su impacto en transiciones de estado celular.

FBP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KHSRP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FBP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KHSRP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KHSRP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FBP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KHSRP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FBP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FBP2 en células tumorales con expresión de KHSRP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.