Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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FBL4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407372
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- FBL4 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico FBL4, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FBL4 Anticuerpo (A-7): sc-376102
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
FBL4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-407372 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
FBXL4 codifica una proteína con dominio F-box y repeticiones ricas en leucina (FBL4) que actúa como componente de reconocimiento de sustratos de los complejos de ligasa E3 de ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–F-box), ayudando a acoplar proteínas específicas a su ubiquitinación y degradación por el proteasoma. Mediante la degradación regulada de proteínas, FBL4 contribuye a programas de proteostasis celular que influyen en la homeostasis mitocondrial, el metabolismo energético y las respuestas al estrés. Variantes patogénicas en FBXL4 se han vinculado a fenotipos mitocondriales encefalomiopáticos graves caracterizados por una fosforilación oxidativa deteriorada y una integridad alterada de la red mitocondrial. Estas características hacen de FBXL4 un objetivo relevante para estudiar cómo las vías mediadas por ubiquitina se intersectan con la biogénesis mitocondrial y el control de calidad en células humanas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO FBL4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FBXL4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FBXL4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FBXL4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FBL4.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FBXL4 para la investigación de la señalización de FBL4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de FBXL4 críticos para la función de FBL4
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FBXL4 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido FBL4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FBL4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FBXL4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FBL4 (h) y el plásmido HDR FBL4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FBXL4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FBXL4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.