FAT10 Lentiviral Activation Particles (m): sc-423986-LAC

Das Mausgen **Ubd** kodiert **FAT10 (Ubiquitin D)**, einen ubiquitinähnlichen Modifikator, der kovalent an Zielproteine konjugiert und so deren raschen Abbau durch das **26S-Proteasom** fördert. Die **FAT10ylierung** funktioniert weitgehend unabhängig von kanonischen Ubiquitin-Ketten und steht in Verbindung mit inflammatorischer Signalgebung, interferonresponsiven Programmen sowie der Antigenprozessierung über **MHC-Klasse-I**-Wege. Die Expression von **Ubd/FAT10** ist durch proinflammatorische Zytokine induzierbar und kann die Proteostase, die Zellzyklusregulation und stressadaptive Antworten durch veränderte Proteinstabilität neu ausrichten. Eine dysregulierte FAT10-Expression wurde in experimentellen Modellen mit Entzündungszuständen und krebsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, was FAT10 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung des immun-metabolischen Crosstalks und der proteasomabhängigen Regulation macht.

FAT10 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Ubd-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

FAT10 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Ubd-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen FAT10-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Ubd-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.