Plásmido Doble Nickase (h) FANCD2: sc-400445-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)FANCD2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa FANCD2 (h) y el plásmido de doble nickasa FANCD2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a FANCD2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FANCD2 Anticuerpo (FI17): sc-20022
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) FANCD2 | sc-400445-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) FANCD2 | sc-400445-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FANCD2 codifica un efector central de la vía de reparación de enlaces cruzados interhebra del ADN asociada a la anemia de Fanconi (FA) y coordina el mantenimiento del genoma durante la fase S. Ante estrés replicativo y daño en el ADN, FANCD2 se monoubiquitina y, junto con FANCI, es reclutada a la cromatina, promoviendo el procesamiento nucleolítico, la síntesis de translesión y la recombinación homóloga mediante interacción funcional con factores de reparación asociados a BRCA. La función de FANCD2 conecta la estabilidad de la horquilla de replicación, la señalización de los puntos de control y la supresión de la rotura cromosómica, favoreciendo la viabilidad celular bajo estrés genotóxico endógeno y exógeno. La alteración o regulación deficiente de FANCD2 se asocia con la anemia de Fanconi y se estudia ampliamente en el contexto de fenotipos de inestabilidad genómica relevantes para la biología del cáncer y los trastornos de reparación del ADN.
FANCD2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FANCD2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FANCD2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FANCD2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FANCD2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.