Plasmide CRISPR d'Activation (h) FAF1: sc-405535-ACT

FAF1 (Fas-associated factor 1) code une protéine adaptatrice cytoplasmique qui couple la signalisation des récepteurs de mort à des voies apoptotiques et protéostatiques en aval. FAF1 interagit avec FAS et des régulateurs des caspases, et module également la signalisation NF-κB, influençant la survie cellulaire, les programmes transcriptionnels inflammatoires et les réponses au stress. Via des associations rapportées avec des composants du système ubiquitine–protéasome, FAF1 contribue au contrôle qualité des protéines et peut moduler la sensibilité cellulaire à l’apoptose extrinsèque. Une expression ou une fonction dérégulée de FAF1 a été reliée dans la littérature à la biologie des cancers, à des processus neurodégénératifs et à des phénotypes liés à l’immunité, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des décisions de destin cellulaire.

FAF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FAF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FAF1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FAF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FAF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FAF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FAF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FAF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FAF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FAF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.