Plásmido CRISPR de Activación (h) Factor XIII B: sc-403574-ACT

F13B codifica la subunidad B del factor XIII de la coagulación, un componente del complejo plasmático transglutaminasa que circula como un heterotetrámero A2B2 y estabiliza la subunidad catalítica A en el torrente sanguíneo. Tras la activación por trombina y la unión de calcio, el factor XIIIa entrecruza la fibrina y otras proteínas de la matriz, reforzando la arquitectura del coágulo y aumentando su resistencia a la fibrinólisis. Mediante estas reacciones de estabilización de la matriz extracelular, la subunidad B del factor XIII contribuye a la hemostasia y a los procesos de remodelación asociados a la reparación de heridas. Las alteraciones en el equilibrio de subunidades de FXIII y la disminución de la actividad de FXIII se han asociado con fenotipos hemorrágicos y una estabilidad anómala del coágulo, lo que convierte a F13B en una diana relevante para estudios mecanísticos en biología de la coagulación.

Factor XIII B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de F13B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Factor XIII B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus F13B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional F13B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Factor XIII B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo F13B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Factor XIII B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Factor XIII B en células tumorales con expresión de F13B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.