Plásmido CRISPR de Activación (h) Factor XIII A: sc-402690-ACT

El F13A1 humano codifica la subunidad A catalítica del factor XIII de la coagulación, una transglutaminasa dependiente de Ca2+ que estabiliza los coágulos de fibrina mediante el entrecruzamiento de las cadenas γ y α de la fibrina y la incorporación de proteínas antifibrinolíticas como la α2-antiplasmina. Esta actividad enzimática se integra en la fase terminal de la cascada de coagulación y modula la remodelación de la matriz extracelular, la reparación de heridas y las interacciones de las células inflamatorias a través del entrecruzamiento covalente de proteínas. La alteración de la función o la expresión del factor XIII A se asocia con una estabilidad deficiente del coágulo y una remodelación tisular anómala, y la actividad de F13A1 también se estudia en el contexto de la biología vascular y de procesos inflamatorios asociados a macrófagos. En consecuencia, F13A1 es un nodo útil para analizar vías que conectan la hemostasia, la resistencia a la fibrinólisis y la dinámica de la matriz en modelos celulares humanos.

Factor XIII A El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de F13A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Factor XIII A El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus F13A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional F13A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Factor XIII A. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo F13A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Factor XIII A en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Factor XIII A en células tumorales con expresión de F13A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.