ETBR Lentiviral Activation Particles (m): sc-420112-LAC

Das murine Gen *Ednrb* kodiert den Endothelinrezeptor Typ B (ETBR), einen GPCR der Klasse A, der Endothelin-Peptide bindet und dadurch vasomotorische Signalwege, die Entwicklung neuralleistenabgeleiteter Zelllinien sowie die Reifung von Melanozyten und des enterischen Nervensystems reguliert. ETBR koppelt vor allem an G-Proteine, die PLC/IP3–Ca2+-Signalgebung, MAPK-Kaskaden und NO-assoziierte Signalwege aktivieren, und beeinflusst so – kontextabhängig – Zellmigration, Proliferation und Differenzierung. Die Aktivität von *Ednrb* ist eng mit Musterbildungsprozessen und der Pigmentzellbiologie verknüpft; Störungen der Endothelin-Signalgebung über ETBR gehen mit Defekten der enterischen Innervation und der Melanozytenfunktion einher. Daher wird *Ednrb* in Mausmodellen häufig als mechanistischer Knotenpunkt genutzt, um die Dynamik der GPCR-Signalübertragung, die Neuralleistenentwicklung und zelltypspezifische Transkriptionsprogramme zu untersuchen.

ETBR Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Ednrb-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ETBR Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Ednrb-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ETBR-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Ednrb-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.