Plasmide Double Nickase (h) ESD: sc-404314-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ESD correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ESD Double Nickase (h) et le plasmide ESD Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ESD. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ESD Antibody (A-5): sc-514892
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ESD | sc-404314-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ESD | sc-404314-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ESD humain code une hydrolase du S‑formylglutathion, une hydrolase à sérine impliquée dans la détoxification du formaldéhyde au sein de la voie de métabolisme des alcools/aldéhydes dépendante du glutathion. En hydrolysant le S‑formylglutathion en glutathion et en formiate, ESD contribue au maintien de l’équilibre rédox cellulaire et limite l’accumulation d’espèces carbonylées réactives susceptibles d’endommager les protéines et les acides nucléiques. L’activité d’ESD s’inscrit à l’interface des réponses au stress oxydant et de l’homéostasie métabolique plus générale, reliant les perturbations de la prise en charge des aldéhydes au stress génotoxique et à des altérations de la viabilité cellulaire. Une capacité de détoxification des carbonyles dérégulée a été étudiée dans des contextes où le stress oxydant et le stress lié aux aldéhydes contribuent à des phénotypes associés à des maladies, notamment dans des processus métaboliques et neurodégénératifs.
ESD Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ESD dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ESD. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ESD. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ESD.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.