ERp72 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402689

Übersicht

PDIA4 kodiert ERp72, ein im endoplasmatischen Retikulum (ER) lokalisiertes Mitglied der Protein-Disulfid-Isomerase-Familie, das Thiol-Disulfid-Austauschreaktionen katalysiert und damit die oxidative Faltung sowie die Qualitätskontrolle sekretierter und membranständiger Proteine unterstützt. ERp72 wirkt innerhalb des ER-Proteostase-Netzwerks zusammen mit Chaperonen und anderen PDIs und trägt zur Signalgebung der Unfolded-Protein-Response (UPR), zum ER-assoziierten Abbau (ERAD) sowie zur Aufrechterhaltung der Redox-Homöostase unter Bedingungen von ER-Stress bei. Indem PDIA4 die Reifung von Client-Proteinen mitprägt und proteotoxischen Stress begrenzt, beeinflusst es Signalwege, die mit Sekretion, Antigenprozessierung und zellulärer Anpassung an Störungen der Proteinfaltung verknüpft sind. Eine dysregulierte ER-Faltungskapazität und chronischer ER-Stress sind an der Krebsbiologie, metabolischen Erkrankungen und neurodegenerativen Prozessen beteiligt, was PDIA4 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Stresssignalgebung und Proteom-Qualitätskontrolle macht.

Das ERp72 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PDIA4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PDIA4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PDIA4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ERp72-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PDIA4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ERp72-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PDIA4-Exone abzielen, die für die ERp72-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PDIA4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ERp72 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ERp72 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PDIA4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ERp72 HDR-Plasmid (h) und ERp72 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PDIA4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PDIA4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.