Plasmide CRISPR d'Activation (h) ERK 3: sc-403457-ACT

MAPK6 code pour la kinase 3 régulée par les signaux extracellulaires (ERK3), une MAP kinase atypique qui intègre des signaux mitogènes et liés au stress afin de réguler la croissance cellulaire, la différenciation, la migration et la dynamique du cytosquelette. La signalisation d’ERK3 est associée à la régulation en aval de programmes transcriptionnels et de réseaux de kinases qui influencent la progression du cycle cellulaire et la motilité, notamment via un couplage fonctionnel rapporté avec des kinases telles que MK5 dans certains contextes. Une expression ou une activité dérégulée de MAPK6/ERK3 a été associée à des phénotypes prolifératifs et invasifs altérés dans plusieurs systèmes modèles, ce qui étaye sa pertinence pour la biologie du cancer et d’autres maladies impliquant une signalisation aberrante et un remodelage tissulaire. En tant que MAPK non canonique, ERK3 constitue un point d’entrée complémentaire pour étudier la diversité des voies MAPK au-delà de la cascade classique ERK1/2.

ERK 3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAPK6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ERK 3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAPK6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAPK6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ERK 3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAPK6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ERK 3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ERK 3 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAPK6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.