Plasmide Double Nickase (h) ErbB4/HER4: sc-400275-NIC

ERBB4 code pour ErbB4/HER4, un récepteur tyrosine kinase de la famille EGFR/ErbB activé par des ligands, qui transmet des signaux issus des neuregulines et de facteurs de croissance apparentés. Lorsqu'il est activé, ErbB4 mobilise les voies de signalisation MAPK/ERK et PI3K–AKT, et peut participer à des programmes transcriptionnels dépendants de JAK/STAT, influençant la prolifération, la différenciation et la survie de manière dépendante du contexte. ERBB4 contribue également à la communication intercellulaire et aux processus de développement dans les tissus neural et cardiaque via l'hétérodimérisation avec d'autres récepteurs ErbB et un traitement régulé du récepteur. Une expression dérégulée de ERBB4, des mutations ou un déséquilibre de sa signalisation sont impliqués dans le remaniement de voies oncogéniques et des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des réseaux de signalisation des récepteurs.

ErbB4/HER4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ERBB4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ERBB4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ERBB4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ERBB4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.