Plasmide Double Nickase (h) Eps15: sc-402303-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Eps15 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Eps15 Double Nickase (h) et le plasmide Eps15 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant EPS15. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Eps15 Antibody (E-3): sc-390259
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Eps15 | sc-402303-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Eps15 | sc-402303-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPS15 code pour le substrat 15 du récepteur du facteur de croissance épidermique (Eps15), un adaptateur de l’endocytose qui se localise aux puits recouverts de clathrine et coordonne l’internalisation des récepteurs. Eps15 interagit avec AP-2, la clathrine et des partenaires se liant à l’ubiquitine afin de réguler la sélection du cargo, la formation des vésicules et les décisions de trafic qui modèlent la signalisation en aval. Par ces fonctions, EPS15 influence le renouvellement des récepteurs aux facteurs de croissance et l’atténuation du signal au sein des voies endocytiques et dépendantes de l’ubiquitine. La dérégulation de l’endocytose et du trafic des récepteurs impliquant EPS15 a été étudiée dans des contextes tels qu’une signalisation proliférative altérée et des perturbations des programmes de transport vésiculaire pertinents pour la biologie des maladies.
Eps15 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EPS15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EPS15. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EPS15. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EPS15.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.