Plásmido Doble Nickase (h) Eps15: sc-402303-NIC

EPS15 codifica el sustrato 15 del receptor del factor de crecimiento epidérmico (Eps15), un adaptador endocítico que se localiza en fosas recubiertas de clatrina y coordina la internalización de receptores. Eps15 interactúa con AP-2, la clatrina y socios de unión a ubiquitina para regular la selección de carga, la formación de vesículas y las decisiones de tráfico que determinan la señalización posterior. A través de estas funciones, EPS15 influye en el recambio de los receptores de factores de crecimiento y en la atenuación de la señal dentro de vías endocíticas y dependientes de ubiquitina. La desregulación de la endocitosis y del tráfico de receptores en los que participa EPS15 se ha estudiado en contextos como la alteración de la señalización proliferativa y las perturbaciones de programas de transporte vesicular relevantes para la biología de enfermedades.

Eps15 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EPS15 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EPS15. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EPS15. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EPS15 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.