Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EphB3 Double Nickase Plasmid (h): sc-403039-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das EphB3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- EphB3 Double-Nickase-Plasmid (h) und EphB3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EPHB3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: EphB3: sc-514139
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
EphB3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403039-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EphB3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403039-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHB3 kodiert die Rezeptor-Tyrosinkinase EphB3, ein Mitglied der Ephrin-Rezeptorfamilie, die nach Bindung membrangebundener Ephrin‑B‑Liganden eine kontaktabhängige Signalübertragung vermittelt. EphB3 reguliert die Zell‑Zell‑Kommunikation, das Remodeling des Zytoskeletts, Adhäsion und gerichtete Migration über Signalwege, die mit Rho‑Familien‑GTPasen, MAPK/ERK‑Signaling und PI3K‑assoziierten Netzwerken verknüpft sind. Während der Entwicklung und bei der Gewebehomöostase trägt EphB3 zur Ausbildung von Grenzen, zur Axonführung und zur Organisation von Epithelien bei; eine Fehlregulation wird in mehreren Krebszusammenhängen mit veränderten Invasions‑ und Differenzierungsprogrammen in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen EPHB3 zu einem nützlichen Ziel, um rezeptorgetriebene Signalausgänge und Zellverhalten in Modellsystemen zu untersuchen.
EphB3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EPHB3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EPHB3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EPHB3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EPHB3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.