Particules Lentivirales d'Activation (h) EphA2: sc-400535-LAC

EPHA2 code pour EphA2, une tyrosine kinase réceptrice de la famille des récepteurs des éphrines, qui assure une signalisation dépendante du contact dans les contextes épithélial et endothélial. EphA2 régule l’adhésion cellulaire, la polarité, la migration et la prolifération via des interactions bidirectionnelles avec les éphrines-A et des voies en aval incluant les GTPases de la famille Rho, MAPK/ERK, PI3K/AKT et la signalisation des adhésions focales. Des perturbations de la signalisation d’EphA2 ont été associées à des modifications de l’architecture tissulaire, des réponses angiogéniques et des phénotypes invasifs, ce qui fait d’EPHA2 une cible fréquemment étudiée en biologie des cancers et dans le remodelage associé aux métastases. L’activité d’EPHA2 est également étudiée dans le cadre de la mise en place des patrons de développement et de la fonction barrière, où la signalisation dépendante du ligand, par opposition à la signalisation indépendante du ligand, peut produire des issues cellulaires distinctes.

Les particules d'activation lentivirales EphA2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de EPHA2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales EphA2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription EPHA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de EphA2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif EPHA2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.