EP3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402485

Descripción general

PTGER3 codifica el receptor EP3 de prostaglandina E2, un GPCR tipo rodopsina que se acopla a Gi/o (y en algunos contextos a Gq) para regular la actividad de la adenilato ciclasa, la señalización por AMPc y las vías de quinasas aguas abajo. La activación de EP3 modula procesos como la inflamación, el tono vascular y del músculo liso, la función plaquetaria y la regulación de la barrera epitelial mediante un control dependiente del contexto de los segundos mensajeros y de las respuestas transcripcionales. PTGER3 participa en redes de señalización de eicosanoides y ácido araquidónico que integran señales de prostaglandinas derivadas de COX con programas inmunitarios y metabólicos. La desregulación de la señalización de EP3 se ha asociado con fenotipos inflamatorios y cardiometabólicos, y se investiga con frecuencia en estudios de cáncer y del microambiente, donde las vías de prostaglandinas influyen en la proliferación, la migración y la evasión inmunitaria.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EP3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PTGER3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PTGER3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PTGER3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EP3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PTGER3 para la investigación de la señalización de EP3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PTGER3 críticos para la función de EP3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PTGER3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EP3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido EP3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PTGER3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EP3 (h) y el plásmido HDR EP3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PTGER3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PTGER3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.