Partículas Lentivirales de Activación (h) Ep-CAM: sc-400220-LAC

EPCAM codifica la molécula de adhesión celular epitelial (Ep-CAM), una glucoproteína transmembrana enriquecida en los contactos célula-célula del epitelio que contribuye a la arquitectura tisular, la polaridad y la proliferación regulada. Más allá de la adhesión, Ep-CAM participa en programas de señalización que se entrecruzan con el control transcripcional asociado a la β-catenina y con el estado de diferenciación epitelial, influyendo en la organización de las uniones y en la expresión génica downstream. La alteración de la expresión de EPCAM se observa con frecuencia en la biología de tumores epiteliales y en la progresión metastásica, y EPCAM también está implicado en la integridad de la barrera epitelial y en fenotipos tipo célula madre. Estas propiedades hacen de EPCAM un nodo genético útil para estudiar la identidad epitelial, la separación/clasificación celular (cell sorting) y las redes transcripcionales vinculadas a la transformación.

Las partículas de activación lentiviral Ep-CAM (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de EPCAM en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Ep-CAM (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción EPCAM, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Ep-CAM. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo EPCAM y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.