EOMES Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420182

Descripción general

Eomes (EOMES) codifica un factor de transcripción tipo T-box que coordina las decisiones de destino celular durante el desarrollo del ratón y la diferenciación inmunitaria. EOMES regula programas transcripcionales que controlan la formación del mesodermo, el patrón embrionario temprano y la especificación de linajes, y constituye un nodo clave en vías que modelan la maduración y la función efectora de los linfocitos citotóxicos, incluidas las respuestas de las células NK y de las células T CD8+. Mediante interacciones dependientes del contexto con reguladores de la cromatina y redes de señalización impulsadas por citocinas, EOMES influye en la proliferación, la migración y los estados de diferenciación terminal. La actividad desregulada de EOMES se ha implicado en alteraciones de la homeostasis inmunitaria y en fenotipos del desarrollo, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos del control transcripcional en el desarrollo y la inmunología.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO EOMES (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Eomes en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Eomes junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Eomes tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína EOMES.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Eomes para la investigación de la señalización de EOMES, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Eomes críticos para la función de EOMES
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Eomes para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido EOMES CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido EOMES CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Eomes. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR EOMES (m) y el plásmido HDR EOMES (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Eomes para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Eomes definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.